االء سعدي عبود * محمد عبد الهادي غالي * كفاح احمد جاسم **

التأثير النسجي لبكتريا Aeromonashydrophila في كبد ذكور الفئران البيض االء سعدي عبود * محمد عبد الهادي غالي * كفاح احمد جاسم ** استالم البحث 1 نيسان 2112 قبول النشر 2 تموز 2112 الخالصة : تم جمع 200 عينة خروج ومن فئات عمرية مختلفة تراوحت ما دون الخمس سنوات الى 40 سنة من مستشفيات بغداد ( م.العلوية لالطفال م. الكندي التعليمي م. حماية االطفال م. بغداد التعليمي ) وللمدة من شهر ايلول 2009 الى شهر ايار 2010.واعتمادا على طريقة العزل والفحوصات المختبرية التشخيصية تم تشخيص بكتريا Aeromonashydrophila بحسب طريقة نموها على االوساط الزرعية مثل وسط MacConkey agar وسط Blood agar ووسط Thiosulfate Citrate Bile salt (TCBS( Sucrose. وتم اجراء فحص الحساسية للمضاد التفريقي التشخيصي O129 وكانت مقاومة له وكذلك التشخيص باالختبارات الكيميائية االحيائية. كما اجريت الفحوص التوكيدية بنظام. Api20E إذ تم تشخيص 10 عزالت بكتيرية تعود لبكتريا Aeromonashydrophila وبنسبة عزل %5 للبالغين واالطفال وأجريت مقايسة الحالة الدموية ) assay ) Hemolysin الختيار العزلة المناسبة للدراسة اذ أظهرت العزلة )2 ) اعلى فعالية النزيم الهيمواليسن وكانت 640 وحدة/ مليلتير بأستعمال الدم البشري. وتم تحديد الجرعة نصف المميتة )LD50( باستعمال التجريع الفموي والتي كانت 10 خلية 10 جرثومية / فأر عند تجريعها فمويا ودراسة تأثيرها في الكبد اذ تم استعمال 28 ذكرا" من الفئران المختبرية بعمر )6-8( اسابيع وبوزن 25-20 غم تم تقسيمها الى اربع مجاميع كل مجموعة حاوية على 7 فأر وجرعت ب 0.2 مل لمدة عشرة ايام اذ سجلت النتائج تغيرات نسجية مرضية في الكبد حيث بينت نتائج التجربة بعد مدة 10 يوم ظهور حاالت االحتقان الدموي )congestion( والنزف الدموي ( hemorrhage ) وحدوث تنكسات ( ) degeneration وتنخرات ( necrosis ). وبينت النتائج انتشاربكتريا Aeromonashydrophila بصورة واسعة واصابتها الفئات العمرية كافة مؤدية الى تأثير سلبي في الكبد في الفئران البيض المختبرية. الكلمات المفتاحية : Aeromonashydrophila مقايسة الحالة الدموية التأثير النسجي في الكبد. 260 المقدمة: تعد بكتريا Aeromonashydrophila احد انواع عائلة Aeromonadaceaeبعد ان فصلت من عائلة Vibrionaceae ألختالف الصفات الكيميائية االحيائية وتهجين DNA واختزال االحماض االمينية ]1[. تتمايز بكونها عصوية او كروية الشكل سالبة لصبغة غرام ال هوائية اختياريا و لها القابلية على النمو بدرجات حرارة مختلفة تترواح مابين 42-4 م وهي محللة للدم وغير مكونة للسبورات والمحفظة capsule وتلتصق بالخاليا الظهارية للمضيف عن طريق االهداب الموجودة عليها [ 2 ]. توجد في المياه العذبه والمالحة اذ تعد البيئة المائية الموطن الطبيعي لها ولجراثيم اخ-رى مثل الكوليرا اذ تسبب حاالت مرضية لالنسان مثل االسهال] 3[ و يتعدى تأثيرها الى حيوانات اخرى مثل االسماك مسببة تهديدا للثروة السمكية و خسائر اقتصادية كبيرة ]4[ تنتقل عن طريق تناول الطعام * كليه العلوم للبنات ** مختبر الصحة المركزي والشراب الملوثين بالبكتريا الى االنسان والحيوان مما تؤدي الى اصابته وكذلك تنتقل عن طريق فتحات الجروح للصيادين ]5[. تم عزل هذه البكتريا من مياه االنهار واالبار والصهاريج وكذلك المياه المعقمة بالكلور ]6[ وعزلت من مياه نهر دجلة في العراق ]7] ومن االغذية المعلبة واالطعمة البحرية ]8[ ومن الحيوانات مثل االرانب واالسماك ] 9 [ومن عينات المرضى المصابين باالسهال ]10[. واستعملت تقنيات مثل PCR للكشف عن الجينات المسؤولة عن االنزيمات او الذيفانات وتحليل جينوم البكتريا من خالل Agaroseفضال Electrophoresis Gel عن استعمال اجسام مضادة وحيدة النسيلة )Specific Monoclonal Antibodies) ] 11 [.وتعزى امراضية هذه البكتريا لما تمتلكه من عوامل ضراوة Virulance Factors التي تتضمن عوامل االلتصاق واالنزيمات مثل البروتيز

واالنوليز واالوكسيدز وغيرها وكذلك الذيفانات وبروتينات الغشاء الخارجي ومتعدد السكريد الشحمي LPS والهيمواليسن والطبقة السطحية S ]12[ Layar وتسبب الكثير من الحاالت المرضية مثل االسهال واصابات الجروح واصابات الجهاز التنفسي والتهاب اغشية السحايا وانتنان وتجرثم الدم والتهاب البريتون والتهابات العظام وغيرها ]13[. اذ تسبب تأثيرات مرضية في اعضاء ونسج الحيوانات مثل الفئران والجرذان واالرانب ]14[ وانواع مختلفة من االسماك ]15[. اذ تسبب تغيرات نسجية تترواح من متوسطة الى شديدة. ويعد الكبد والطحال والرئة اكثر االعضاء تأثرا بالبكتريا وسمومها ]16[. وان هدف الدراسة الحالية هو التعرف على تأثير هذه البكتريا في الكبد. المواد وطرائق العمل : االوساط الزرعية المستعملة: تم تحضير االوساط المدرجة افي االتي بحسب تعليمات الشركة المجهزة BDH- England والمثبتة على العبوة وعقمت بجهاز الموصدة تحت ضغط 1 جو و 121 م لمدة 15 دقيقة وهذة االوساط هي:- ماء الببتون اكار Alkaline peptone water القاعدي الماكونكي MacConkey Agar مرق مغذي الوسط المغذي الصلب Nutrient Broth Blood اكار الدم االساس Nutrient Agar Brain مرق نقيع القلب و الدماغ Agar Base ( T C B S اكار heart infution broth )Thiosulfate Citrate Bile Sucrose اكار Muller Hinton Agar وسط مولر -هنتون سايمون سترات Simmon Citrate medium Semi solid وسط المانتول شبه الصلب Kligler Iron اكار كليكلر الحديد Manitol agar جمع العينات : تم جمع 200 عينة اسهال من مستشفيات مختلفة في بغداد وهي ( م.العلوية لالطفال م. الكندي التعليمي م. حماية االطفال م. بغداد التعليمي )مدينه الطب( (. و من فئات عمرية مختلفة دون الخمس سنوات الى 40 سنة خالل المدة الزمنية من شهر ايلول )2009( حتى شهر ايار )2010 ). وضعت العينات التي جرى جمعها في اوعية بالستيكية معقمة وتركت في حاوية مبردة الى حين نقلها للمختبر ونشطت العينات على وسط Alkaline peptone water لمدة )4-6( ساعة, وخططت على االوساط الزرعية التشخيصية الماكونكي واكار الدم وحضنت لمدة 24 ساعة بدرجة 37 م المحاليل والمواد المستعملة : في االختبارات التشخيصية والكيميائية االحيائية واختبار الهيمواليسين والدراسة النسجية : كاشف االوكسيدز Oxidase reagent حضر بحسب ]17] وكاشف الكتليز حضر ومحلول ماكفرالند القياسي بحسب] 18[ و مثبت الفورمالين Formalin Fixative حسب ]19[ والصق ماير] 20 [وصبغة االيوسن] 21 [وصبغة الهيماتوكسلين] 22[ و محلول داريء الفوسفات الملحي Phosphate (PBS) Bufferالمستعمل Saline Solution للكشف عن الهيمو اليسين حضر بحسب ]23[ وعالق خاليا الدم الحمر لالنسان. المجاميع التجريبية Experimental Groups استعمل 56 ذكرا" من الفئران وقسمت الى اربع مجاميع رئيسة وبواقع 14 فأرا" في كل مجموعة وتم تجريع الفئران فمويا بالبكتريا ولتخافيف مختلفة المجموعة االولى :-جرعت فمويا بجرعة 0.2 مل من التخفيف المجموعة الثانية جرعت فمويا بجرعة 0.2 مل من التخفيف 10⁶ المجموعة الثالثة جرعت فمويا بجرعة 0.2 مل من التخفيف 10⁴ المجموعة الرابعة عدت هذه المجموعة حيوانات سيطرة Control جرع كل منها 0.2 مل من المحلول الفسلجي. واستمرت عملية التجريع للتخافيف المذكورة مدة 10 ايام متتالية وتضمنت التضحية بالحيوانات واختتمت بتشريح الحيوانات وجمع النماذج المطلوبة لعضو الكبد. حساب الجرعة المميتة النصفية استعملت ( 5 ) مجاميع بواقع ( 5 ) فئران لكل مجموعة وجرعت الفئران فمويا بالعالق البكتيري بواقع 0.2 مل لكل من التخافيف اآلتية (,10¹⁴, 10¹⁶,10¹⁰, 10¹² 10⁸( فيما جرع افراد مجموعة السيطرة محلوال" فسلجيا". وبعد مرور ( 7 ) ايام تم حساب عدد الفئران الحية والميتة نسبة الى العدد الكلي الذي تم تجريعه وحسبت الجرعة المميته النصفية لعدد الفئران باتباع طريقة ]24[. تحضير اللقاح الجرثومي تمت تنمية العزلة البكتيرية المختارة على وسط نقيع الدماغ القلب Brain heart infusion broth وحضنها لمدة 24 ساعة وزرعها على وسط اكار الدم blood agar وثم اخذ loop full واحدة من المزروع البكتيري ووضع في المحلول الملحي الفسلجي ومعادلته مع ما في انبوب ماكفرالند القياسية إذ إن 0.5 من محتوى انبوب ماكفرالند تعادل وعلى اساس ذلك تم اجراء التخافيف االخرى.)10⁶,10⁴( 261

تحضير المقاطع النسجية حضرت المقاطع النسجية لعضو الكبد باستعمال طريقة شمع البرافين ]25[. ثم التصوير المجهري. النتائج والمناقشة : -: تم الحصول على 10 عزالت بكتيرية من بكتريا Aeromonashydrophilaمن مجموع 200 عينة اسهال لفئات عمرية مختلفة و بنسبة عزل %5 وكما في جدول ( 1 ) -: جدول ( 1( عالقة الفئات العمرية بعزل بكتريا Aeromonashydrophila الفئات العمرية 5 سنوات فما دون 10-5 سنة 15 سنة - 10 عدد العينات 50 40 30 عدد العزالت 5 1 ال يوجد النسبة المئوية 10% 2.5% 0% 8% 2 25 20 15 20-15 سنة 25-20 سنة 30-25 سنة ال يوجد 1 0% 6.6% 10 10 200 35-30 سنة 40-35 سنة المجموع اليوجد 1 10 0% 10% 5% اظهرت النتائج ان االطفال هم االكثر عرضة لالصابة بحاالت االسهال وتباينت عينات االسهال من اسهال مائي الى اسهال دموي مع مخاط. وبلغت عدد العزالت لبكتريا Aeromonashydrophila المعزولة من االطفال 5 عزالت من 50 عينة اسهال اي بنسبة 10%. و تعد هذه النسبة مقاربة لما سجل في استراليا ]26] اذ عزلت من االطفال المصابين بنسبة % 10.9. واعلى مما سجل في ايران اذ بلغت نسبة العزل من االطفال 3.9% ]27 ] وكذلك في جيبوتي اذ حصل نسبة %3.3. ]28]. اما محليا فجاءت النسبة مقاربة لما حصل عليه [ 29[ والتي بلغت 11.5% فيما حصل ]30[ على نسبة عزل % 6 4. من االطفال ولم يستطع عزلها من البالغين. تم عزل بكتريا Aeromonashydrophila في هذه الدراسة من عينات خروج البالغين للفئات فوق سن 15 سنة. عزلت بكتريا Aeromonashydrophilaمن عينات الخروج لجميع الفئات العمرية و بنسبة %5 وهذه النتيجة جاءت مقاربة لما توصلت اليه [ 31[ حيث وصلت نسبة العزل الى %6.6 من حاالت االسهال في بغداد. اما السبب في تباين النسبة المئوية للعزل بين باحث وآخر في عينات الخروج المرضية فيعود ذلك الى اختالف وقت جمع العينة و الوعي الصحي والنظافة وكذلك تغير المواسم وانخفاض وارتفاع درجات الحرارة وحجم العينة المدروسة واختالف االعمار والموقع الجغرافي وكذلك اختالف مصادر العزل. بعدها تم تشخيص البكتريا تشخيصا اوليا بعد زرعها على وسط اكار الماكونكي blood agar ووسط اكار الدم MacConkey agar و اكار TCBS اذ تظهر مستعمرات بكتريا Aeromonashydrophilaعلى وسط الماكونكي شاحبة صغيرة وغير مخمرة لسكر الالكتوزكما في شكل (1( أما على وسط اكار الدم فتظهر المستعمرات كبيرة الحجم رصاصية اللون تحيط بها هالة شفافة كبيرة كاملة التحلل -β hemoysis )شكل 2( في حين تظهر على وسط TCBS بشكل مستعمرات صغيرة جدا صفراء باهتة داللة على تخمر سكر السكروز )شكل 3 )وبهذا تكون بكتريا Aeromonashydrophila مشابهة لبكتريا الكوليرا.Vibriocholera ولتميز العزالت عن الجنس االخير اجري لها اختبار الحساسية لقرص التشخيص والتفريق ) O129 )150ɱg/ml اذ تظهر بكتريا Aeromonashydrophila مقاومتها لهذا العامل في حين تظهر الكوليرا حساسية لها شكل )4( شكل )1( نمو البكتريا على اكار الماكونكي شكل )2( نمو البكتريا على اكار الدم 262

شكل )3( نمو البكتريا على اكار TCBS ثم اجري لها االختبارات الكيميائية االحيائية وكما موضح بالجدول التسلسل 1 االختبار اختبار انزيم االوكسيدز Oxidase test اختبار انزيم الكاتليز Catalase test اختباراالندول Indol test اختبار انزيم اليوريز Urease test أختبار استهالك السترات Citrate test اختبار الحركة Motility test اختبار Kliglar iron agar test النتيجة + شكل )4( مقاومة البكتريا للقرص التفريقي 0129 شكل )5( االختبارات الكيميائية االحيائية للبكتريا Api 20 E + + - - 2 3 4 5 6 7 متحركة A*/k Gas No No H2S ووصوال لنوع البكتريا ولغرض اجراء الفحوص التوكيدية تم اجراء التشخيص بعدة Api20E اذ اظهرت النتائج ايجابياتها وسلبياتها لالختبارت الكيميائية االحيائية )E ( Api20 كما في الشكل )5( الفعالية الحالة /1 64 التخفيف اختبرت قابلية العزالت المحلية لل Aeromonashydrophilaعلى انتاج الهيمواليسين من خالل زرعها على وسط أكار الدم اذ أظهرت النتائج قدرتها جميعا" على إظهار مناطق تحلل تحيط بالمستعمرة البكتيرية النامية والتي تشير الى الفعالية االنزيمية لهذه العزالت. يكمن تأثير الهيمواليسين في قدرته على تحليل األغشية لكريات الدم الحمر وتحطيمها وتحرير الهيموكلوبين منها الذي يعد أحد مصادر الحديد والذي تحتاجه البكتريا في النمو والتكاثر. يفرز الهيمواليسين في الطوراللوغارتمي ويتحلل في طورالثبات اعتمادا" على نتائج تحلل أكار الدم من عزالت ال. Aتم hydrophila اجراء طريقة مقايسة الحالة الدموية ( assay (Hemolysin باستعمال الدم البشري. التي أظهرت ان أعلى فعالية النزيم الهيمواليسين كانت 640 وحدة/ مليلتر عند استعمال الدم البشري )شكل 6( وهذه الفعالية في قيمة الهيمواليسين يمكن ان تعود الى نوعية خاليا الدم الحمر المستعملةالجراء مقايسة الحالة الدموية التي تختلف فيما بينها من ناحية عدد وحجم وشكل الخاليا ومحتواها من الهيموغلوبين (Hb) ومقدار ال PCV.[ 32 ] السيطرة شكل )6( اختبار الهيمواليسن 263

التغيرات النسجية في الكبد بين الفحص المجهري للدراسة الحالية أن نسيج الكبد مؤلف من فصيصات. Lobules يتألف الفصيص من وريد مركزي )CV( Central vein يحتل مركز الفصيص وتمتد منه حبال كبدية Hepatic من صفين من الخاليا الكبدية) HE ( cordsمتكونة Hepatocytes والتي تترتب بشكل شعاعي حول الوريد. تحصر بينها أوعية دموية شعرية تدعى بالجيبانيات الدموية Sinusoids كما موضح بالشكل (7( شكل )7( مقطع نسيجي يوضح الشكل الطبيعي للكبد التغيرات النسجية المرضية في الكبد أظهرت نتائج الفحص المجهري للمقاطع النسجية للكبد في الفئران المعاملة بالتركيز 10 4 خلية جرثومية / فأر حصول احتقان دموي كما في الشكل )8 ) اما التركيز المخفف 10 خلية 6 جرثومية / فأر فقد تسبب في نزف دموي واحتقان وكذلك حدوث تنخرات كما في الشكل )9(. وأدى التركيز المخفف 10 خلية 8 جرثومية / فأر الى حدوث تنخر في الخاليا الكبدية وكذلك تنكس فضال عن وجود ارتشاح الخاليا االلتهابية )IN( Infiltrationكما في الشكل )10 ). CO 20mµ شكل ) 8 (مقطع يبين حصول احتقان دموي حاد )CO( في الكبد عند تجريع الفئران بالتركيز المخفف 10 4 خلية جرثومية / فأر لمدة 10 يوم ( صبغة ) H&E 264

CO N h 20mµ شكل ) 9 (حدوث نزف دموي )h( hemorrhage وكذلك احتقان دموي )co( وتنخر) N) في الكبد عند تجريع الفئران بالتركيز المخفف 10 خلية 6 جرثومية / فأر لمدة 10 يوم ( صبغة (H&E IN N m 20μ شكل )10) حدوث تنكس خلوي )D( Degenaration وتنخر خلوي )N( وكذلك ارتشاح الخاليا االلتهابية احادية النوى )H&E في الكبد عند تجريع الفئران بالتركيز المخفف 10 خلية 8 جرثومية / فأر لمدة 10 يوم ( صبغة )IN( وتتفق نتائج دراستنا مع ما توصلت له [33] من حصول النزف الدموي )hemorrhag) واحتقان دموي في االوردة المركزية ( )congestion الذي يحدث نتيجة التأثيرات المستمرة لنقص االوكسجين وقد اشار ]34[ الى ان عضو الكبد هو اكثر االعضاء تأثرا ببكتريا Aeromonashydrophila وكذلك الرئة. وتتفق النتائج التي تم الحصول عليها مع ما توصلت اليه [ 35 [من حصول تنخرات وتنكسات في الكبد, واكد ]36[ ان حدوث تنخر في خاليا الكبد الذي يؤدي الى حدوث فرط التنسج ( )hyperplasia والضخامة ( )hypertrophy استجابة تعوضية اذا تكبر الخاليا وتصبح متعددة النوى فضال عن حدوث انتفاخ ( )swelling في خاليا الكبد و حدوث تنخرات قد يعود الى امتالك البكتريا عوامل الضراوة وخاصة السموم البكترية التي تؤدي الى انتفاخ خاليا الكبد وحدوث ضرر بأنسجة الكبد واضعاف فعالية وظائفه. وان حدوث التنخر في الكبد قد يرجع الى ما تفرزه البكتريا من سموم وانزيمات خارج خلوية وقد اشار ايضاالى ان حدوث االصابة في الكبد تؤدي الى زيادة افراز انزيمات الكبد (ALAT ) alanine ( ASAT ) aspartate aminotransferase نتيجة التغيرات في نفاذية اغشية الخاليا خالل االصابة. وقد يرجع ذلك الى حدوث التنخر والتنكس و ارتشاح الخاليا التي ترتبط مع حدوث زيادة في افراز انزيمات الكبد.وان الحقن بالسم الداخلي فقط بعد استخالصه يؤدي الى تغيرات نسجية في الكبد مما يؤثرفي وظيفته من خالل تحطم النسيج الوعائي الكبدي كما ان حقن انزيم البروتيز ايضا بعد استخالصه يؤدي الى تأثيرات على كبد الفئران تتمثل بالتوزيع العشوائي للخاليا 265

الكبدية حول االوعية الدموية وفقدانها الشكل السداسي المركزي وارتشاح سايتوبالزم الخاليا الكبدية ]37[ المصادر :, K.2009.Ahighly Virulent pathogen Aeromonashydrophila from fresh water Cray fish PacifastacusLeniusclus.J.Invertebr. pathol. 101(1):56-66. 10-Aslani, M. M. and Hamzeh, H.S. 2004. Characterization and Distribution of virulence factors in Aeromonashydrophila strain isolated from fecal samples of Diarrheal and asypotmatic healthy persons in Ilam,Iran. Iranian Biomedical J.8(4):199-203. 11- Mailafia, S. and Nok, A. J. 2010. Comparisim of DNA restriction patterns of Aeromonashydrophila isolated from human by Agarose Gel Electerophoresis (AGE). ASIAN.J.EXP.BIOL. 1(1) : 80-83. 12-Sha, J. Erora, T. E. Alyea, R. Wang, Sh. Olano, J. P. Pancholi, V. and Chopra, A. K. 2009. Surface Expressed EnolaseContribtes to the Pathogenicity of Clinical isolate of Aeromonashydrophila. J.Bacteriol. 191(9):3095-3107. 13-Sabashumar, R. Thayumanara, T. Vivekananadhan,G.N. and Lakshmanaperumakay, P.2006 Occurrence of Aeromonashydrophila in acute gasteroenterioitis among children. Indaien J Med Res. 123 :61-66. 14- Abdel Gwad, A. M. and Abdel Rahman, A.A. 2004 isolation and significance of Aeromonashydrophila group infarmed rabbit at assiut governorate. ASSUniv. Bull Environ. Res. 7(1): 85-93. 15-Adanir, D. O. R. and Turutogle, H. 2007. Isolation and Antibiotic Susceptibility of Aeromonashydrophila in a Carp ( Cyprinmcarpio ) Hatchery Farm. Bull Vet InstPulawy. 51 : 361-364. 1- Jawetz,Melnic.J. L and Adelbergs. E.G.F.Carrol, K. C.Butel, J. Morse, S. A.2007. Medical Microbiology.24 ed. MC- Graw hill.new York. Ch:18 p :273. 2- Murray, P. R. Baron, E. and Faller, M.A. 2000 Manual of Clinical microbiology. 7 th ed. USA. ch 32 PP:507-516. 3- Nester, E. W. Anderson, D. G. Roberts, C. E. and Nester, M. T. 2007. Microbiology. A Human Perspective. fifth edition. Ch :10. p 252-254. اللوزي نوري. 2005. دراسة حول امراض االسماك في الوطن العربي. الباب الخامس االمراض المشتركة بين االنسان واالسماك. المنظمة العربية للتنمية -4 الزراعية. 611 611-. 5- Rahim, Z. Khan, S. I. and Chopra, A. K. 2004. Biological Characterization of Aeromonas SPP Isolated from Environment. Epidemio and Inf J. 132(4): 627-636. 6-Bhowmik, P.Bag, P.K. Hajra, T.K. Rituparna.D.Sarkar, P. andramamurthy, T. 2009 Pathogenic Potential of Aeromonashydrophila isolated from surface waters in Kolkota. Indiain. J. Med Microbial. 58: 1549-1558. 1- عجيل, هشام صادق علي. 2008 دراسة تأثير مستخلص النمو الخام لبكتريا Aeromonashydrophila في خطوط خاليا سرطانية وطبيعية. رسالة ماجستير. كلية العلوم. جامعة الكوفة. 8- Koca, C. and Sarimenmeto, B. 2009. Isolation and Identification of motile Aeromonas SPP in turkey meat. AnkaraUnvi Vet FakDerg. 56 : 95-98 9- Jiravanichpaisal, P. Roos, S. Easman,L. Liu, H.and Soderhall 266

fifty percent and point. AMJ. HYg 27: 493-497. 25-Bancroft, J.D. and Steven, A.1982. Theory and practices of histological technique.2 nd ed.churchill Livingstone.London., pp:662. 26- Freitas, A.C.; Souza, S.M.S.; Maceto, L.C.; Pinto, E.G. and Pereira, S.S.1998. Aeromonas species associated with gasteroenteritis in children :Prevalence, Characteristics and virulence properties. Rev. Microbiol. 29:152-157. 27-Aslani, M. M. and Alikhani, M. Y. 2004. The Role of Aeromonashydrophila in Diarrhea. Iranian J.Publ Health. 33 (3) : 54-59. 28- Mikhail,I. ; Fox.;Haberger,R. ; Ahmed,M. and Abbate,E.1990.. Epidemiology of bacterial pathogens.associated with infections diarrhea in Djibouti. J.Clin.Microbiol.28 :956-961. 29- الطائي, محمد ابراهيم نادر. 2005 دراسة كيموحيوية النزيم البروتيز المنتج من العزلة المحلية لبكتريا. Aeromonashydrophila اطروحة دكتوراه. كلية العلوم. جامعة بغداد. 30- ابراهيم رواء خليل.2002. دراسة بعض عوامل الضراوة لبكتريا Aeromonashydrophila المعزولة من حاالت مرضية.رساله ماجستير. كلية العلوم.جامعة بغداد. 31- المجمعي ايمان جواد كاظم.2002 دراسة بيئية وفسلجية لجرثومة Aeromonashydrophila ودور السم المعوي في امراضيتها. رسالة ماجستير. كلية العلوم. جامعة بغداد. 32- Ghenghesh, Kh. S. Ahmed, S. F. El Khalek, S. R. Gendy, A.and Klena, J. 2008. Aeromonas Associated in infection in Developing Counteris. J. Infected Developing Counteris. 2(2): 81-98. 33- السعدي, حلى يونس فاضل 2002 دراسة التأثيرات المرضية لمتعدد السكريد الشحمي المستخلص من بكتريا 16- Belal, S. K.N. Hassan, N. and Mansour, A.2009Histopathological and Studies for Evaluation of Aeromonashydrophila inducedpulmonary Structural Changes with Emphasis on the Possible Protective Effect of Inositol Hexaphosphate. Advan. Biol. Res.3(5-6):222-230. 17- Merker, R. I. 1998. Media and Reagent in FDA Bacteriological Analytical Manual 8 th ed. Revision, A. U. S. Food and Durg Administration, Center for food Safety & Applied Nutrition. Association of Official Analytical Chemists (AOAC) International. Washington, U.S.A. 18- Benson, H. J. 2002. Microbiological application :Laboratory manual in general microbiology, 8 th ed. McGraw Hill Co., Inc., NewYork -61 الحاج حميد احمد. 1998. التحضيرات المجهرية الضوئية ( التقانات المجهرية( االسس النظرية والتطبقية. الطبعة االولى. مركز الكتب االردني. عمان االردن 20- Moussa, T. A. ; EL-Asser, A. B. and AL-Banhawy, M. A. ( 1984). Principle of Histochemistry. DARA AL-Maaref. Cario 17. 21-- Kiernan, J. A.1999. Histological and Histochemical Methods, Theory and Practice. 3 rd ed. Butter Worth Heinermann. Oxford, PP:114. 22- Luna, H. and Lee, G. 1968. Manual of histologic stainig methods the armed forces institute of pathology. 3 rd ed. The blakistondivition McGraw-Hill. New York. 23- Cruickshank, R. ; Duguid, J. P.; Marmion, B. P. and Swain, R. H. A. 1975. Medical Microbiology. 12 th ed. Vol. 2. Churchill living stone. Edinburgh. 24- Reed, L. J. and Muench, H 1983. Asimple method of estimating 267

.Aeromonashydrophila رسالة ماجستير. كلية العلوم. جامعة بغداد. 36 - Macsween, R. N. M. 6190. Liver, Biliary tract and Exocrine pancreas In:Anderson, J.R. (ED).Muirs textbook of Pathology.11 th ed.edward Arnold (publishers ). Ltd. London.pp661-722. 51 -الطائي, محمد ابراهيم نادر. 2003 دراسة كيموحيوية النزيم البروتيز المنتج من العزلة المحلية لبكتريا.Aeromonashydrophila اطروحة دكتوراه. كلية العلوم. جامعة بغداد المعزولة من Aeromonashydrophila عينات سريرية محلية. رسالة ماجستير. كلية العلوم. جامعة بغداد. 34- Brenden, R. A. and Huizinga, H. W.1986. Pathophysiology of Experimental Aeromonashydrophila infection in Mice. J Med Microbiol. 21 : 311-317. 53 -العكيدي, رنا سعدي عبود. 2002 دراسة بعض الصفات والتأثيرات المناعية للذيفان بكتريا من المعزول المعوي The Histological Effect of Aeromonashydrophila on liver of male albino mice Alaa Sadie Abbood*Mohammed Abdel HadiGali* Kefah Ahmad Jassim** *College of Sciences for Women ** Central Public Health Laboratory Abstract: Two hundred of stool samples from different age groups(less than 5 to 40 years) were collected from Al-Elwea, Al-Kendy, Children welfare and Baghdad Teaching hospital from September 2009 to May 2010. Using the isolation methods & diagnostic laboratory tests, Aeromonashydrophila was isolated according to the growth on MacConkey, blood &TCBS agar. The sensitivity test for diagnostic antibiotic O129 was done, also by biochemical test using api20e. The percentage of isolation for Aeromonashydrophila was 5% for all patients. The hemolysin assay was also done to select the proper isolate for the study. The isolate 2 showed high activity for hemolysin at its 640 unit/ ml by using human blood. The LD50 was detected and found it was 10 10 bacterium / mouse when orally administrated in this study using 28 male of albino mice age 6-8 weeks and weight 20-25 g were divided into 4 group (7 mice / groups and were orally administrated with 0.2 ml of inoculums 10 4, 10 6, 10 8 bacterium / mouse) for 10 days. These results show pathological changes in liver after 10 days. The changes include congestion,hemorrhage, degeneration & necrosis. Tha bacteria Aeromonashydrophila had a wide spread & can infect all age groups & it had a negative effect on liver 268